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药用真菌菌种制作母种培养基主要成分有哪些理化性状？

2017-02-07 11:41:15张***
药用真菌菌种制作母种培养基主要成分有哪些理化性状？药用真菌菌种制作母种培养基主要成分有哪些理化性状？： 培养基主要成分的理化性状和制备方法如下。 (1) 琼脂琼脂、明胶、硅胶都可作为培养基中的凝固剂，但经常用?

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  •    培养基主要成分的理化性状和制备方法如下。 (1) 琼脂琼脂、明胶、硅胶都可作为培养基中的凝固剂，但经常用的是琼脂，也称琼胶、洋菜。其理化性状：熔点为96°C、凝固点40°C、微酸性，含水量16%、灰分4。4%，含氧化钙1。15%、氧化镁0。
      77%、氮0。4%。其凝固点较高，含氮量低，凝固后又可熔化，配成的培养基比较硬，保水能力好，不易干燥，是很好的凝固剂。琼脂是多糖类，其主要成分是半乳糖（L-半乳糖、 1>半乳糖、3,6-脱水-L-半乳糖）和少量的葡萄糖醛酸及丙酮酸等。虽然它不是绝对纯无营养的物质，但一般不为真菌的碳源，在没有添加营养物质的纯水琼脂培养基上，真菌菌丝不能生长，只适于单孢子的分离，适宜作为药用菌生理研究培养基的凝固剂。
       为了减少灭菌加热时培养基产生沉淀物，配出比较澄清的培养基，琼脂使用前应用蒸馏水洗涤，以减少无机盐和可溶性有机物的含量。如果将450克干琼脂，加水至5000毫升并加人吡啶500毫升（可溶解许多有机和无机物质），20小时后滤去液体，用蒸馏水洗3次，再用95%酒精浸泡一夜后滤去酒精，晾干，则能得到更洁净的琼脂。
       药用真菌大都喜在酸性培养基中生长，制作琼脂培养基时常要加稀盐酸，如将pH值调到4,在酸性条件下经高压灭菌，琼脂被破坏不能凝固，这是制作培养基常遇到的问题。因此，琼脂培养基的酸度一般不能调为PH4。但有些药用真菌如猴头菌，菌丝适宜在PH2。
      4~5。0的范围内生长，以pH4最适宜，超过pH5。 1就会影响菌丝生长，则应在灭菌后将试管移到无菌室内，用无菌吸管加 人数滴预先单独灭过菌的0。 5%苹果酸或柠檬酸，取少量培养基用精密试纸检査，调到所需要的酸度，确定加人量，然后趁热将酸液滴人试管培养基中进行酸化。
       (2) 谷物、植物块茎、根茎、木材、树皮浸出液的制备马铃薯是制备培养基常用材料，应先去皮；发芽的薯块芽眼处含有有毒的龙葵碱，应挖去芽眼，切块洗净后称重，加水煮沸，一般半小时，应软而不烂，用预先浸湿的8层纱布过滤，滤液方可使用。 甘薯也常用作培养基，其制作方法与马铃薯相同。
      但应选择完好无病的薯块作培养。甘薯块根在贮藏期间，其伤口处最容易感染黑斑病，用病薯作培养基，虽挖去病斑、高压灭菌后也很难杀死厚垣孢子，会引起培养基真菌性污染。 木材作培养基应选择幼嫩枝条或边材，切成小块或粉碎后称重；植物块茎、根茎作培养基时先在清水中洗净，削去外皮后称重，加适量的水煮沸10~15分钟，谷物种子洗净后应先浸泡，然后煮沸1~2小时，趁热用双层纱布过滤，补充水量后即为浸出液。
       (3) 麦芽汁的制备取大麦芽1000克，加水3000毫升，在60°C下保温糖化。取糖化液0。5毫升加碘液2滴，无蓝色反应即表示糖化完成。为使麦芽汁澄清，可加人2~3个鸡蛋的蛋清。拌匀后煮沸，蛋白质凝固后，过滤加水稀释到1。1克/毫升，即为澄清麦芽汁。
       (4) 酵母汁的制备取干酵母7~10克，加水1000毫升，煮沸静置，上清液过滤后即为酵母汁，每升培养基用10毫升。 (5) 制作方法 ① 按配方精确称取各种营养物质。 ② 马铃薯等块茎、植物根去皮后切块洗净，加水1000毫升，文火煮沸30分钟后过滤取汁；玉米粉称重后加水1000毫升，加热到70°C左右，保持60分钟，过滤取汁；麦芽称重后加水1000毫升，加热至60°C左右，保持60分钟，过滤取汁。
       ③ 将称好的琼脂，加人上述配好的液体培养基中，边加热边搅拌，待琼脂完全熔化后，用湿纱布迅速过滤，最后补足水量至 1000毫升，酸碱度调整：根据不同药用真菌的要求，用稀碱（1摩尔/升NaOH)、稀酸（1摩尔/升HC1)来调整酸碱度至适度为止，趁热进行分装。
       分装前要备好容器，分装试管时，要用玻璃漏斗进行分装，尽量避免培养基黏附管口，如培养基不慎粘着管口或管壁，要用纱布擦净，以免培养基粘住棉塞而引起污染。试管装量视需要而定，斜面培养基，装量为试管长度的五分之一或四分之一；深层培养基， —般为试管长度的二分之一或三分之二。
      培养基分装好后均要加上棉塞或者胶塞。棉塞用普通棉花制作，不宜使用脱脂棉。棉塞的大小、松紧要与试管口的口径相称，塞人试管的棉塞要紧贴管壁，不留缝隙，松紧度以提起棉塞而试管不脱落，拔出棉塞有轻微的声音为适宜。标准的棉塞应是塞头略大，不易变形，人管的部分占塞总长的三分之二，外露三分之一为宜；然后把2~3只试管捆扎在一起，棉塞外包扎牛皮纸或旧报纸。
      再用油纸包扎，装人高压灭菌锅灭菌，装锅时试管均要竖放，切勿倾斜或平置。蒸汽压力1。2千克/厘米2,温度达121°C，保持30分钟。灭菌后，让其压力和温度自然下降之后，取出培养基按要求摆成斜面，斜面的长度以不超过试管的二分之一为宜，培养基冷却凝固，即成斜面培养基。
      放在 25~28°C条件下，空白培养1~2天，检查无污染，才能使用。
    2017-02-07 12:06:15
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